محیط کشت کورن میل آگار (Corn Meal Agar – CMA)

۱. تعریف محیط کشت

محیط کشت کورن میل آگار (CMA) یک محیط تخصصی برای رشد و شناسایی برخی قارچ‌ها به ویژه Candida albicans است. این محیط به دلیل داشتن آرد ذرت و مواد مغذی مختصر، برای رشد کند اما تولید ساختارهای تمایزی مانند کلامیدوسپور مناسب است. همچنین حاوی Tween 80 است که تولید کلامیدوسپور را تحریک می‌کند. CMA هم برای تشخیص قارچ‌ها و هم برای نگهداری طولانی‌مدت کشت‌های قارچی کاربرد دارد.

۲. ترکیبات محیط کشت CMA

ترکیبات رایج CMA برای تهیه یک لیتر محیط شامل موارد زیر است:

• pH محیط: حدود 6.0–6.5

• CMA معمولاً فقیر از مواد مغذی است تا تولید ساختارهای تمایزی را تحریک کند.

۳. طرز تهیه محیط کشت CMA

مرحله به مرحله:

1. ترکیب مواد خشک: آرد ذرت، پپتون و آگار را با هم مخلوط کنید.

2. اضافه کردن آب: آب مقطر را اضافه کرده و خوب مخلوط کنید.

3. اصلاح pH: pH محیط را به حدود 6.0–6.5 تنظیم کنید.

4. استریل کردن محیط: اتوکلاو به مدت 15–20 دقیقه در دمای 121°C و فشار 15 psi.

5. اضافه کردن Tween 80: پس از خنک شدن محیط تا حدود 50°C، اضافه کرده و مخلوط کنید.

6. ریختن در پلیت‌ها: محیط را در پلیت‌های استریل بریزید و اجازه دهید سفت شود.

نگهداری:

• محیط پودری: 10–30°C

• پلیت آماده: 2–8°C

۴. نحوه کشت قارچ روی CMA

1. آماده‌سازی پلیت: CMA را به دمای محیط برسانید و از سلامت سطح محیط اطمینان حاصل کنید.

2. انتخاب نمونه: معمولاً از کلنی‌های Candida albicans که روی Sabouraud Dextrose Agar رشد کرده‌اند استفاده می‌شود.

3. کشت‌گذاری:

   • روش نقطه‌ای (Spot Inoculation): نمونه را به مرکز پلیت منتقل کنید.

   • روش نواری (Streaking): برای جدا کردن کلنی‌ها، نمونه را روی سطح پلیت بکشید.

4. شرایط رشد: پلیت را در دمای 25–30°C نگهداری کنید. تولید کلامیدوسپور معمولاً طی 24–48 ساعت مشاهده می‌شود.

5. مشاهده و تشخیص: با میکروسکوپ کلنی‌ها را بررسی کنید:

   • Candida albicans: تولید کلامیدوسپور مشخص است.

   • سایر قارچ‌ها ممکن است رشد داشته باشند اما کلامیدوسپور تولید نکنند.

نکات مهم:

• از تماس مستقیم با محیط و نمونه‌ها بدون ابزار استریل خودداری کنید.

• رطوبت محیط باید مناسب باشد؛ محیط خیلی خشک یا مرطوب تولید کلامیدوسپور را کاهش می‌دهد.

• پلیت‌ها را برای نگهداری طولانی در 2–8°C قرار دهید.