محیط کشت برلیانت گرین فنول رد لاکتوز ساکارز آگار

آگار سبز برلیانت فنل قرمز را به عنوان یک آگار انتخابی و تشخیصی برای جداسازی، به دنبال غنی‌سازی و غنی‌سازی انتخابی، سالمونلاهای غیر از سالمونلا تیفی از غذاها و خوراک‌ها توصیف می‌کند. این فرمول که از هلند سرچشمه می گیرد، به طور گسترده در اروپا ارزیابی شده است. در روش استاندارد جامعه اروپا و در استانداردهای سازمان بین المللی استاندارد استفاده می شود. آگار سبز برلیانت فنل قرمز از عصاره گوشت، پپتون، عصاره مخمر، دی سدیم هیدروژن ارتو فسفات، سدیم دی هیدروژن ارتو فسفات، لاکتوز، ساکارز، فنل قرمز، سبز درخشان، آگار و آب مقطر یا دیونیزه تشکیل شده است.

ویژگی های محیط کشت برلیانت گرین فنول رد لاکتوز ساکارز
در شرایط آسپتیک، 1 میلی لیتر محلول سبز درخشان به محلول شکر/فنل قرمز که تا حدود 55 درجه سانتیگراد سرد شده است، اضافه می شود. مقادیر حدود 40 میلی لیتر از محیط تازه تهیه شده توزیع می شود و تا دمای 45 درجه سانتیگراد در ظروف پتری استریل به قطر 14 سانتی متر سرد می شود. اگر ظروف بزرگ در دسترس نبود، حدود 15 میلی لیتر در ظروف پتری با قطر 9 سانتی متر بریزید. کلنی های معمولی گونه های سالمونلا. عمدتا صاف، محدب بسیار کم و صورتی/قرمز مرطوب هستند. ارزیابی کیفیت بر اساس بهره وری، انتخاب پذیری و ظاهر مشخصه کلنی ها انجام می شود. ترکیب پپتون، تریپتون و عصاره مخمر باعث می شود که محیط بسیار مغذی باشد. آمینو اسیدها و زنجیره های بلند پپتیدها را تامین می کند. کلرید سدیم مسئول تعادل اسمزی است. لاکتوز و ساکارز هر دو منابع کربوهیدرات قابل تخمیر هستند. فنل قرمز یک شاخص اسید-باز است. رنگ زرد را به باکتری های تخمیر کننده لاکتوز و یا ساکارز می دهد. سبز درخشان محیط رشد اکثر باکتری های گرم منفی و گرم مثبت را مهار می کند و به سالمونلاها کمک می کند. میکروب‌هایی مانند سالمونلا تیفی، گونه‌های شیگلا، اشریشیا کلی، گونه‌های سودوموناس، گونه‌های پروتئوس و استافیلوکوکوس اورئوس عمدتاً ساکن هستند. باکتری های تخمیر کننده غیر لاکتوز طی 24-18 ساعت پس از انکوباسیون، کلنی های سفید تا صورتی متمایل به قرمز را نشان می دهند. گونه های سالمونلا تیفی و شیگلا ممکن است در این محیط رشد نکنند. با این حال، گونه های پروتئوس، سودوموناس و سیتروباکتر ممکن است با ایجاد کلنی های قرمز کوچک، پاتوژن های روده ای را تقلید کنند.

خصوصیات محیط کشت برلیانت سبز فنل قرمز لاکتوز ساکارز آگار (BPLS)

• حاوی فنل قرمز برای نشان دادن اسیدی شدن محیط با تغییر رنگ آن از قرمز به زرد
• محیط کشت انتخابی
• سبز درخشان در محیط برای جلوگیری از رشد باکتری های گرم مثبت مانند شیگلا

استفاده از محیط کشت برلیانت سبز فنل قرمز لاکتوز ساکارز آگار (BPLS)

• مناسب برای شناسایی سالمونلا، کلبسیلا، پروتئوس ولگاریس و…

خرید محیط کشت برلیانت سبز فنل قرمز لاکتوز ساکارز آگار (BPLS)

کاربرد های محیط کشت برلیانت گرین فنول رد لاکتوز ساکارز
برلیانت گرین آگار برای انتخاب و تمایز سالمونلا (به غیر از S. typhi) از غذاها یا مواد خوراکی استفاده می شود. برلیانت گرین آگار برای استفاده در تشخیص بیماری یا سایر شرایط در انسان در نظر گرفته نشده است. اولین بار توسط کریستنسن و همکاران در سال 1925 به عنوان یک محیط انتخابی برای جداسازی سالمونلا (به جز S. typhi) معرفی شد. این رسانه توسط موسسه بهداشت عمومی هلند، اوترخت اصلاح شد. اصلاح برای افزایش گزینش پذیری محیط با افزایش غلظت رنگ بود. این فرمول توسط سازمان استاندارد بین المللی، روش های استاندارد جامعه اروپایی، انجمن بهداشت عمومی آمریکا و انجمن شیمیدانان رسمی تحلیلی نقل شده است. این محیط برای خرده فرهنگ های از محیط های غنی سازی انتخابی مناسب است. با این حال، از آنجایی که این محیط بسیار انتخابی است، ممکن است تعداد کمی از سالمونلاها نادیده گرفته شوند. این محیط برای S. typhi و Shigella spp توصیه نمی شود. محیط های بازدارنده کمتر مانند X.L.D. (NCM0021) و Hektoen Enteric Agar (NCM0006) در تشخیص سالمونلا تیفی و شیگلا spp مفید خواهند بود. که توسط برلیانت گرین آگار مهار میشوند.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید.
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.